Electroblotting Protocol

 

Gelelektroforese

Ved gelelektroforese forårsaker et elektrisk felt proteiner eller DNA-fragmenter å bevege seg gjennom en gelplate. Mindre fragmenter eller proteiner beveger seg raskere enn større. Når proteiene eller fragmentene er separate, kan biologer overføre dem til en membran og enten flekke dem eller bruke antistoffer for å identifisere bestemte proteiner.

Electroblotting

Selv om den nøyaktige protokollen varierer, inkluderer elektroblotting typisk følgende trinn.



Etter elektroforese plasserer forskerne geleglasset på flere ark filterpapir og en svamp nedsenket i en overføringsbufferløsning. De plasserer deretter en nitrocellulose- eller PVDF-membran over gelen, og dekker den med mer filterpapir.



Ved å bruke et elektrisk felt får de negativt ladede fragmentene eller proteinerne å migrere oppover fra gelen til membranen. På dette tidspunktet kan forskere fjerne og sonde membranen.

Betraktninger

Når man lagrer membranen og gelen for elektroblotting, er det viktig å eliminere luftbobler, da de kan hindre migrering av proteiner eller nukleinsyrer. Elektroforese etterfulgt av elektroblotting er typisk en foreløpig for vestlig, nordlig og sydlig blotting, som alle kan identifisere spesifikke DNA / RNA-fragmenter eller proteiner. Biologer må ofte separere proteiner og nukleinsyrer (DNA og RNA) på grunnlag av størrelse eller ladning, ved hjelp av en teknikk som kalles gelelektroforese. Etterpå kan biologer overføre prøven fra gelen til en membran for identifikasjon. Dette kalles elektroblotting.